血浆病原DNA提取试剂盒的操作简便性也是血浆DNA提取试剂选择的一个重要因素。操作过于复杂,不仅费时费力,还容易导致样本间的交叉污染,也容易损失样本。
选择血浆病原DNA提取试剂盒也取决于你需要多少DNA?
大多数DNA分离试剂盒公司都提供含有类似成分的试剂盒,这种试剂盒可以根据处理样品的体积进行缩放。对于特别的应用,当涉及到培养物或组织样本的数量时,选择可能较少。
小量制备:>15 mL
中量提取:15-25 mL
大规模制备:100-200 mL
巨型制备:500-2,500 mL
甚**达2.5-5升。
在选择DNA提取试剂盒时,较重要的变量可能是你所使用的生物体。
1、许多试剂盒都有用于DNA分离的不同成分,这些试剂盒之间的主要区别在于细胞是如何被分解的,因为有些比其他较较有挑战性。例如,形成生物膜的可能比传统的基于去垢剂的方法需要较强的裂解技术。
2、动物组织:用于动物组织DNA分离的试剂盒通常具有较温和的裂解技术,因为大多数动物细胞不像细胞那样有细胞壁。然而,动物组织DNA提取的挑战往往在于选择合适的组织匀浆方法。此外,许多动物DNA纯化试剂盒不使用/氯仿萃取或乙醇作为沉淀步骤,以减少破坏DNA的风险。
3、植物:当涉及到植物DNA分离时,必须考虑到其他一些因素,需要注意污染物的去除。植物在纯化过程中通常含有未分离的糖,因此,洗涤剂选择性地与DNA结合并从溶液中析出,通常是先将洗涤剂溶解在高浓度的盐溶液中,然后提取DNA。
4、血液:由于技术上的许多新进展,血液DNA分离试剂盒中有多种裂解技术和提取方法可供选择。从血液中分离出的DNA将在很大程度上决定你使用的裂解和提取的类型。无论应用是什么,一定要选择一种能够提供纯净、完整、双链和浓缩DNA的试剂盒,以获得较好地效果。
血浆病原DNA提取试剂盒产品特点:
1、操作简便快速,20分钟左右可获得理想的DNA;
2、提取DNA纯度高,无抑制剂,1.7<A260/A280≤2.0;
3、产量较高,较国内同类产品高出20%;
4、样本范围广,可用于新鲜、冷冻或陈旧的全血样本。
血浆病原DNA提取试剂盒采用特别的裂解液配方,可直接从新鲜、冷冻或陈旧的全血中提取高质量的基因组DNA,也可以直接提**到血液中感染的细胞DNA, 省去了一般血液DNA提取试剂盒所需的白细胞分离步骤,操作简便快速,只需几十分钟左右即可完成血液DNA提取,并且DNA提**率较高,可在200 μl 全血中提取2-5ug左右基因组DNA。血浆病原DNA提取试剂盒采用了较新的优良离子膜、裂解液和洗脱液,经过多次优化,提**到的DNA纯度较高,较大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于PCR、荧光定量PCR和各种酶切试验等。
血浆病原DNA提取试剂盒的操作步骤:
1、取出洗涤液,按以下操作:
洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇;42mL加入18mL无水乙醇,混匀。
洗涤液B:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇,混匀。
配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。
2、取1.5mL离心管,加入200μL血液样本,再加入200μL 裂解液及40μL 消化液,振荡混匀,65℃水浴10 分钟。
3、加入150μL异丙醇(总体积的25%),混合均匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。
4、将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,12,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液;
5、将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液A至吸附柱内,12,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。
6、将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm 离心1 分钟,弃收集管内废液。
7、按每份样本40μL 取洗脱液,放置于灭菌1.5mL离心管,65℃预热。
8、将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 离心2 分钟,离去残留的洗涤液。
9、取出吸附柱,放入新的1.5 mL 灭菌离心管内,在吸附柱中心加入40 μL 预热洗脱液,静置2分钟,12,000 rpm 离心1分钟,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
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