用于检测或样本较多情况下的检测,操作复杂如果导致交叉污染会引起误诊,还会影响出检测报告的时间。因而,选用操作简便、流畅的血浆病原DNA提取试剂盒非常重要。
血浆病原DNA提取试剂盒的优势:
1、从血液样本中分离基因组DNA,线粒体DNA,病毒DNA等;
2、样本制备时间少;
3、纯化的DNA具有优异的质量和产量,并且可应用于很多下游应用,包括PCR、qPCR、测序、基因分型、病毒检测、Southern印迹分析。
血浆病原DNA提取试剂盒中时间成本、生产率的考虑:
当一次处理**过50个样本时,不再考虑使用小量柱纯化,高通量DNA提取试剂盒是较好的选择,它可以以96孔的形式运行,以便在需要同时处理多个样本的DNA的实验。
DNA提取试剂盒有各种规格和大小,然而,共同的主线是,所选择的试剂盒能产生干净和浓缩的DNA。可以定期评估DNA提取物的数量和质量,以确保试剂盒适合此应用类型。
血浆病原DNA提取试剂盒采用特别的裂解液配方,可直接从新鲜、冷冻或陈旧的全血中提取高质量的基因组DNA,也可以直接提**到血液中感染的细胞DNA, 省去了一般血液DNA提取试剂盒所需的白细胞分离步骤,操作简便快速,只需几十分钟左右即可完成血液DNA提取,并且DNA提**率较高,可在200 μl 全血中提取2-5ug左右基因组DNA。血浆病原DNA提取试剂盒采用了较新的优良离子膜、裂解液和洗脱液,经过多次优化,提**到的DNA纯度较高,较大限度地去除了蛋白、色素、脂类等杂质污染,可以直接应用于PCR、荧光定量PCR和各种酶切试验等。
游离DNA提取方法一般有TRizol方法、离心柱法、磁珠法。其中,Trizol方法与离心柱相比,提取效果相当,但是因其对操作者带来的毒性,现在越来越被弃用。磁珠法比较适合机器自动化提取,如果没有核酸提取仪,只是使用磁力架配套提取,磁珠法的操作就比较麻烦且容易导致样本交叉污染。另外,根据研究,磁珠法的核酸提**率不如离心柱法。如果要提取的游离核酸的量比较低,选择离心柱法。对于游离DNA含量较低的样本或比较珍贵的样本或样本总数不是很多的实验室,核酸提取方法应是离心柱法。
在选择DNA提取试剂盒时,较重要的变量可能是你所使用的生物体。
1、许多试剂盒都有用于DNA分离的不同成分,这些试剂盒之间的主要区别在于细胞是如何被分解的,因为有些比其他较较有挑战性。例如,形成生物膜的可能比传统的基于去垢剂的方法需要较强的裂解技术。
2、动物组织:用于动物组织DNA分离的试剂盒通常具有较温和的裂解技术,因为大多数动物细胞不像细胞那样有细胞壁。然而,动物组织DNA提取的挑战往往在于选择合适的组织匀浆方法。此外,许多动物DNA纯化试剂盒不使用/氯仿萃取或乙醇作为沉淀步骤,以减少破坏DNA的风险。
3、植物:当涉及到植物DNA分离时,必须考虑到其他一些因素,需要注意污染物的去除。植物在纯化过程中通常含有未分离的糖,因此,洗涤剂选择性地与DNA结合并从溶液中析出,通常是先将洗涤剂溶解在高浓度的盐溶液中,然后提取DNA。
4、血液:由于技术上的许多新进展,血液DNA分离试剂盒中有多种裂解技术和提取方法可供选择。从血液中分离出的DNA将在很大程度上决定你使用的裂解和提取的类型。无论应用是什么,一定要选择一种能够提供纯净、完整、双链和浓缩DNA的试剂盒,以获得较好地效果。
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