中净环球净化可提供实验室工程、细胞实验室工程、净化车间的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域,能与外界隔离,不能穿行或受其他干扰。理想的无菌操作室应划为三部分:较衣室、缓冲间、无菌操作间。较衣室供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩;缓冲间位于较衣间与操作间之间,目的是为了保证操作间的无菌环境。无菌操作间于无菌操作、细胞培养;其大小要适当,且其**部不宜过高,不**过2.5m,以保证紫外线的效果;墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁,台面要光滑压塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。
清洁和消毒区应与其他区域分开,主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。储藏区:主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等,此环境也需要清洁无尘。孵育区:本区对无菌的要求虽不比无菌区严格,但仍需清洁无尘,因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行,后者费用高,一般实验室多采用孵箱进行工作。制备区:在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
目前绝大部分细胞实验室使用**净工作台实现无菌操作,具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。侧流式工作台:空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧,也有从上向下或从下向**向对侧,形成气流屏障保持工作区无菌,工作台结构为封闭式;外流式工作台:净化后的空气面向操作者流动,因而外方气流不致混入操作,工作台结构为开放式,但进行有害物质实验操作对操作者不利。**净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度,符合要求的**净工作台其洁净度应达到100级,用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应**过3.5个/L;空气流量应控制在0.75-1.0m3/s;菌落数平均<1个,根据无菌状况必要时需要置换过滤器。
中净环球净化可提供实验室、第三方检测实验室、微生物实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
细胞培养实验室构建方案
(一)细胞培养实验室的设置
细胞培养实验室与其他一般实验室的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。
细胞培养实验室应分为以下几个区:无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。
1.无菌操作区
(1)无菌操作室:无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域,尽量能与外界隔离,不能穿行或受其他干扰,一般地理位置在部分。
理想的无菌操作室应划为三部分:
a)较衣室---供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b)缓冲间---位于较衣间与操作间之间,目的是为了保证操作间的无菌环境,同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。
c)无菌操作间---于无菌操作、细胞培养。其大小要适当,且其**部不宜过高(不**过2.5m)以保证紫外线的有效灭菌效果;墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁,台面要光滑压塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。
(2)净化工作台:操作简单,安装方便,占用空间小且净化效果很好。一般培养室使用的净化工作台主要有两种: a) 侧流式或称垂直式b)外流式或称水平层流式。
净化工作台工作原理(大致相同) ---通常是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经空气过滤器精滤,由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。
净化工作台应用注意:
(1)净化工作台应安装在隔离好的无菌间或清洁无尘的房间内,以免尘土过多易使过滤器阻塞,降低净化效果,缩短其使用寿命。
(2)新安装的或长期未使用的工作台,工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作,然后再采用药物灭菌法或紫外线灭菌进行灭菌处理。
(3)使用净化工作台前,应先用75%酒精擦洗台面,并提前以紫外线灭菌灯照射30~50min处理净化工作区内积存的微生物。关闭灭菌灯后应启动风机使之运转两分钟后再进行培养操作。
(4)净化工作区内不应存放不必要的物品,以保持洁净气流流型不受干扰。
(5)注意净化区内气流的变化,一旦感到气流变弱,如酒精灯火焰不动,加大电机电压仍未见情况改变则说明滤器已被阻塞,应及时更换。一般情况下,过滤器三年更换一次。更换高过滤器应请人员操作,以保持密封良好。粗过滤器中的过滤布(无纺布)应定期清洗更换,时间应根据工作环境洁净程度而定,通常间隔3-6个月进行一次。
(6)净化工作台使用完毕应及时清理工作台面上的物品并用酒精擦洗台面使之始终保持洁净。
(7)净化工作台应定期进行功能测试,检查净化工作台各项工作指标是否达到要求,例如进行无菌试验,定期检查台面空气的洁净度是否达标。
**净工作台的无菌程度检查,**净工作台在消毒处理后,无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数;取直径约90mm平皿,在**净工作台内点燃酒精灯,在酒精灯旁,以无菌操作,将平皿半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml,制成平板,在30~35℃预培养48小时,无菌后将平板3个,以无菌方式带入**净工作台内左、中、右各放一个;打开平皿盖扣置,平板在空气中暴露30分钟后将平皿盖盖好,置30~35℃培养48小时,取出检查,100 级清洁度要求: 3个平皿上生长的菌落数平均不得**过1个。
**净工作台应定期请有关部门检查其洁净度,应达到100级(一般用尘埃粒子计数仪)检测尘埃粒径≤5衸的粒数不得**过3.5个/升;空气流量应控制在0.75~ 1. 0m3/s;菌落数平均<1个,可根据无菌状况必要时置换过滤器。
2.孵育区
本区对无菌的要求虽不比无菌区严格,但仍需清洁无尘,因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。
3.制备区
在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
4.储藏区
主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等,此环境也需要清洁无尘。
5.清洗和消毒灭菌区
清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开,主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。
中净环球净化可提供细胞实验室、实验室、GMP实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
细胞实验室*仪器:
一、CO2培养箱
CO2培养箱是细胞培养的*仪器,它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境,如适宜的温度、湿度、酸碱度、O2浓度等。细胞在体外培养时很容易受到各种、微生物的感染,因此,CO2 培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要。Thermo系列CO2培养箱具有的灭菌和抑菌功能。Hepa 过滤器,箱体内达到100级空气质量;不锈钢抛光内胆,有效抑制微生物附着;
二、纯水系统
细胞培养过程中,内对细胞的生长有很大的影响,水中的内直接参与细胞凋亡,血清中内含量越低,对细胞毒性越小,越利于细胞的生长和传代;内含量过高,会直接导致细胞提前老化。而常规的普通蒸馏水在玻璃器皿中按标准方法蒸馏二次得到的双蒸水ddH20是不能满足要求的,细胞培养用水一般要求双蒸水(0. 8MQ以上),因此,必须配置正式的水纯化系统,采用无内纯水配制所有培养用试剂。
三、**净工作台/生物安全柜
细胞培养对无菌环境要求很高,与CO2培养箱一样,在细胞操作时,一般需要在100级空气质量条件下进行,因此**净工作台或生物安全柜就必须配备。
四、液氮罐
为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,胚胎ESC,诱导多能IPS,间充质MSCs,要将细胞冻存。冻存的温度一般为液 氮温度-196℃,因此,需要液氮罐。在此环境中,一般细胞可以保存十年具有活性,同时液氮罐必需配备报警器,液氮量减少时及时添补液氮量。
五、温冰箱
细胞的冻存过程需要一系列程序降温, 一般4°C 下存放30 min,转放-20°C 1hour,再转入-70至80°C过夜,之后才可以转移到液氮内(-196°C),这时就必须配备一台-86C温冰箱。一般温冰箱保存细胞可达数月,对于不需要长期冻存的细胞,可暂时放于温冰箱保存。
六、恒温水浴
从液氮或温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于37°C水浴中快速复苏之后才传代培养,因此,恒温水浴也是细胞实验室*仪器,复苏过程中要注意水浴时间1-2min,随时观察。
七、离心机
细胞培养需要离心收集传代细胞,所以需要配置低速的常温离心机,对于后期细胞内容物的分离则需要高速冷冻离心机。
八、移液器和细胞培养的大量耗材
细胞实验中有大量频繁的移液操作,因此各种微量移液器、瓶口分配器、移液管控制器是**的。各类细胞培养板、细胞培养瓶、移液管等耗材较是不可或缺的,而且一次性,用量大。
除上述仪器外,高压灭菌锅、倒置显微镜也是细胞培养的*仪器。
常用的培养器皿:
培养瓶:由玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞,胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容量(ml)表示,如250ml、100ml、 25ml 等;进口培养瓶则多以底面积(cm2) 表示。
培养皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常用的培养皿规格有10cm、9cm、6cm、 3. 5cm等。
多孔培养板:为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂,可同时测试大量样本,易于进行无菌操作。培养板分为各种规格,常用的规格有: 96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
中净环球净化可提供实验室、细胞实验室的咨询、规划、设计、施工、安装、改造等配套服务。
实验室洁净空调系统的主要作用是保证各功能房间内部实验环境的空气品质,对防止交叉感染、*防爆等没有要求,因此系统划分时并不需要严格区分不同洁净度等级和不同功能的房间。补偿室内排风量和保持室内正压所需新风量之和;室内每人新风量不应小于40m3/h;送风量的计算首先按照换气次数计算送风量,万级净化区取换气次数为25h-1,10万级净化区取换气次数为15h-1,30万级净化区取换气次数为10h-1。
气流组织选择各房间气流组织均选择非单向流流型,采用上送侧下回的送回风方式。回风口上边沿距地高度不**过0.5m,下边沿距地高度大于0.1m,且回风口尽量设在门附近。送风、回风具体指标、技术要求均由厂家提供,按生物制品生产净化要求设计。净化空调机组内表面及内置零部件应选用耐消品腐蚀的材料或面层,且材质表面要光洁。内部结构应便于清洗,并能顺利排放清洗废水,不易结尘、滋生霉菌。机组内各级空气过滤器前后应设置压差计,测量接管应通畅,安装严密。表冷器冷凝水排出口应具备自动防倒吸功能,并在负压时能顺利排出冷凝水,凝结水管不能直接与下水管道连接。空调机组箱体的密封应可靠。由于该项目洁净度等级高为万级,因此要保证当机组内维持1000Pa的静压值时,箱体的漏风率不大于2%。
实验室针对的研究对象是具有完整生命体的生物单位,对无菌室要求非常高,因此实验室设计规划建设需要统筹全局,确保实验环境无菌操作,避免微生物及其它有害因素的影响。
深圳市中净环球净化科技有限公司是一家专业从事洁净室系统设计、施工及洁净室设备生产、销售,并提供专业化配套服务的高科技企业,公司始终秉承“以人才为基础,让科技服务于客户,为社会发展做贡献”经营理念,全心全意的为客户创造较优质产品,提供满意的服务。公司自成立以来,凭借自主创新的精神,开拓进取的科学管理,立志发展成为全国较具竞争力的行业**企业之一。(提供净化工程、净化产品、节能环保、LED车间、SMT车间、食品化妆品车间咨询、设计、施工) 中净环球净化科技(ccg-sz)提供微电子、LCD、光电、光伏、精密机械、制药、生物安全 实验室、医院手术室、食品化妆品、钢结构等领域工程设计、制造、安装调试、检测综合性成套服务。以洁净技术为**,在ISO9001**质量体系认证、ISO14001际环境管理体系下进行30万-10级洁净系统整体规划设计、安装.公司的产品有:风淋室、货淋室、传递窗、洁净工作台、初中效过滤、高效送风口、洁净棚、自净器、FFU净化单元、洁净服、洁净耗材。 中净环球净化科技秉承“建*洁净室,创***品牌”的企业目标,倡导“务实、认真、敬业、创新”的****观,致力于**产品的研发和生产,提供优质的品牌产品与服务,净化世界各地生产者的生产环境,不断提升公司的利润与**,促进员工、股东与社会的共同繁荣。