大肠平板计数法检测分为两个阶段
大肠平板计数法检测分为两个阶段。在初培养中,选取2~3 个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿,每皿接种1mL。同时取1mL生理盐水加入另外的无菌平皿作阴性对照。迅速将 15mL~20mL冷却至 46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)加入每个平皿中。小心地旋转平皿,使培养基与样液充分混匀,等到琼脂凝固以后,再加入3mL~4mLVRBA 覆盖平板表层。翻转平板铺匀后,DST大肠菌群检测系统仪,放在 36(℃±1)℃培养18~24h。平板菌落数按照以下方法选择:选取菌落数在 15CFU~150CFU之间的平板,天津DST大肠菌群检测系统,分别计数平板上出现的典型和的大肠菌群菌落。
大肠菌群检测的关键在于方法的选用大肠菌群检测的关键在于方法的选用,食品中大肠菌群检测有两种表示方法。
1、是以100mL(g)检样内大肠菌群较大可能数(MPN)表示,检测方法需使用GB/T 4789.3-2003《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》;
2、以每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值表示,检测方法需使用GB 4789.3-2016《食品安全 食品微生物学检验 大肠菌群计数》。
3、现行食品标准中规定的大肠菌群指标以“CFU/克或CFU/毫升”为单位的,适用GB 4789.3-2016,故检测样品前需根据产品标准认真选择方法。
例如,DST大肠菌群检测系统装置,GB/T2717-2003酱油卫生标准中对大肠菌群的要求需使用方法一GB/T 4789.3-2003。又如GB/T 2718-2014酱油卫生标准中对大肠菌群的要求需使用方法二GB4789.3-2016。
用灭菌吸管吸取待检样液1.0mL,加入无菌平内。每个样品接种三个连续稀释度,每个稀释度接种两个平皿。于每个加样平内倾注15mL45~50℃的Aiiz-gal琼脂,迅速轻轻转动平,使混合均匀。待琼脂深固后,再倾注3mL-5mL Aliz-sal琼脂覆盖表面。同时将Aliz-gal琼脂倾人加有1mL上述无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的无菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后,翻转平板,干37 1℃培养箱培养18h-24h。取出平板,DST大肠菌群检测系统仪器,计数紫色(或红色)菌落。
培养基检验原理:胰酪胨提供碳氮源、维生素和矿物质满足细菌生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;磷酸二氢钾和磷酸氡二钾是培养基pH缓冲剂:月桂基硫酸钠可抑制革兰氏阳性菌的生长;大肠菌群可产生-半乳糖苷酶,分解液体培养基中的酶底物茜素-B-D-半乳糖苷(Aliz-gal),使素游离并与固体培养基中的铝、钟、铁、钱离子结合形成坚备(或红色)的罄合物,使菌落呈现相应的颜色。
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