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致病性大肠埃希菌有下列五个病原群。（1）肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）：引起霍乱样肠毒腹泻（水样泻）（2）肠致病型大肠埃希菌（EPEC）：主要引起婴儿腹泻。（3）肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）：可侵入结肠黏膜上皮，引起志贺样腹泻（能产生粘液脓血便）。（4）肠出血型大肠埃希菌（EHEC）：又称产志贺样毒（VT）大肠埃希菌（SLTEC或UTEC），其中O157:H7可引起出血性大肠炎和溶血性尿毒综合征（HUS）。临床特征为严重的痉挛，反复出血性腹泻，伴发热，变黑链霉菌、呕吐等，变黑链霉菌。严重者可发展为急性肾衰竭。（5）肠粘附（集聚）型大肠埃希菌（EAggEC）：也是新近报道的一种能引起腹泻的大肠埃希菌细菌是常见的菌株，变黑链霉菌，包括大肠杆菌、乳酸菌、金黄色葡萄球菌等。变黑链霉菌

甘油菌为做好的菌悬液与50%的甘油等体积混合后做成的形式，里面甘油浓度为20-25%。收到后可直接吸取100-200μL甘油菌接种到液体培养基中扩大培养。可以-80℃保存，保存周期3年。穿刺菌：穿刺菌为用接种针接种好菌种后插入到固体培养基中，经培养后，会在接种针穿刺的地方形成明显的穿刺线，收到该形式菌种后可挑取穿刺线上的菌接种到相应的培养基中，一定温度培养即可。可在4℃保存一个月。定量菌液一般为工作菌种（常规为三代）定量成客户要求的浓度，一般情况下是现配现发货。运输的时候我们会加入冰袋运输，-20度保存12个月。云南游动放线菌菌株菌株资源的管理和利用也需要与国际上的标准和规范相协调。

有些铜绿假单胞杆菌的保藏方法，如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害，保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。铜绿假单胞杆菌的多聚酶链式反应基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成模板DNA经加热至93摄氏度左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。

铜绿假单胞杆菌离心的目的是两个：去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。关于细胞贴壁少的问题，冻存细胞解冻时1毫升细胞液要加10毫升－15m培养液，而培养基越少细胞越容易贴附。复苏细胞分装的问题，试验中复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。菌株研究的国际合作将加强知识共享和文化交流。

pH值：发酵培养的pH值对婴儿双歧杆菌发酵液中活菌数的影响明显，在pH6.5的条件下，发酵液菌体浓度较高，lg活菌数为9.77，折算发酵液活菌数约为5.84×109 cfu/mL，表明pH值为6.5为婴儿双歧杆菌的较为合适发酵培养pH值。搅拌速度：发酵罐的搅拌转速对婴儿双歧 杆菌发酵液中活菌数的影响明显。搅拌转速提升，发酵液活菌数反而随之下降，这可能是因为婴儿双歧杆菌是厌氧菌，在发酵过程中需要厌氧环境。搅拌转速的增加，一定程度上增加了发酵体系中的溶解氧，使该菌株的生长环境发生变化所致。在转速为200 r/min条件下发酵液的lg活菌数较高达到9.93，折算活菌数为8.33×109 cfu/mL，表明婴儿双歧杆菌的较为合适搅拌转速为200 r/min。乳酸菌是一类被普遍利用的菌种菌株，可被用于食品生产、商业用途等。卡哈瓦刺盘孢菌株

菌株与人类健康之间存在紧密关系，在疾病预防中有普遍的应用前景。变黑链霉菌

通常铜绿假单胞杆菌温度太高，有时会得不到扩增产物；铜绿假单胞杆菌温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成。传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作保藏厌氧细菌用)，培养后于4-6摄氏度冰箱内保存。液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。变黑链霉菌

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