化学 物理 生物 PCR实验室

PCR实验室的场地限制条件较多，且因时间要求较为紧迫，部分医院可能连50平米的场地都无法提供，为了能尽快满足各医院的新毒检测需求，一个非常紧凑的PCR实验室可以将空间设计在仅为35平米左右，但是其防污染能力较差，小编不推荐。
PCR实验室的空气流向必须严格按照试剂储存和准备区一标本制备区-扩增区-扩增产物分析区空气压力逐渐递减方式进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。需要严格的通风设计，若通风设计不合理，会使风速流向混乱，甚至危害人们健康。

实验室建设的重点
为了避免样品出现污染以及检测结果出现阳性或假阳性等现象，为了保证检测结果的准确性、真实性，在实验室建设中严格做到立区域设计、功能分区明确，保证实验室洁净环境、人流与物流要分流、室内环境的压差与气流组织方向，重点的是要做到避免交叉污染。
1、平面布局：不管是组合式还是分散式布置的PCR实验室，各个功能房间都均设置立的缓冲间；
2、气流的走向：PCR实验室的气流走向需遵循单一方向，从试剂贮存准备区—样品制备区—配制和扩增区—产物分析区。

PCR实验室平面布局
PCR实验室原则为4个单的工作区域，由扩增前区到扩增后区，且要严格分开。实验材料、试剂、记录笔、纸、清洁材料等，只能从扩增前区流向扩增后区，即从试剂制备区-样品制备区—扩增区—扩增产物分析区，不得逆向流动。实验室的气流也应从扩增前区流动到扩增后区，不得逆向流动。
各工作区域应设置缓冲间，工作间与缓冲间之间宜安装联锁装置。不同功能的核酸检验工作区应是分隔立的工作室，并有明显的标志，各区间不能直通。各区之间如果是紧密相连，需安装物品传递窗。每个工作区域的**部应安装紫外灯，紫外灯的波长为254nm。
实验室较为理想的布局模式为有一个走廊，试剂制备区，样品制备区，扩增区和产物分析区很规范的排列在一起。内实验室区域设为正压或常压状态，缓冲间内设为负压状态，使这三个区的空气流向由实验区域内向外，缓冲间内通向内实验室和走廊的门可安一种联锁装置，当一个门打开时，另一门必须关闭状态，防止出现两个门同时打开的情况。

PCR实验室并没有严格的净化要求，但是为避免各个实验区域间交叉污染的可能性，宜采用全送全排的气流组织形式。同时，要严格控制送、排风的比例以保证各实验区的压力要求。
1、试剂贮存和准备区
该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区，不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。
对与气流压力的控制，本区并没有严格的要求。
2、标本制备区
该区域主要进行的操作为标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为正压，以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外，由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染，所以应避免在本区内不必要的走动。
3、扩增反应混合物配制和扩增区
该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外，已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区) 的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区) 制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中，通常在轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染危险性，*二次加样必须在本区内进行。
本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在**净台内进行。
4、扩增产物分析区
该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。
本区是主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。
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