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磷酸化蛋白的WB第三方检测有哪些方法呢?50 度水浴 30min 后,用 TBST 洗 5 分钟 ,3 次即可去除已孵育结合的抗体。许多人会建议 55 度水浴 30min。Strip solution 是用来去除已结合的抗体,但也会去除部分的蛋白,导致蛋白信号变弱。我本人经实验发现水浴时有时温度不稳定,温度定为 55 度时往往其温度容易**过,导致较多的蛋白也被去除,故建议温度设为 50 度 30min ,既能有效去除已结合的抗体,又比 55 度较能保护蛋白。Strip 时一定要注意: membrane 一定要完全泡在 strip solution 中(可用较硬的塑料膜封好),然后要完全浸入水中,使受热均匀 。这一点很重要,要不然,随后压出来的总蛋白也好,内标也好就会不均一,无法进行比较。我曾将同一张membrane 用我提供的方法 strip 了 3 次,分别压不同的抗体(因为有时候蛋白分子量很接近),效果都不错。西藏qPCR技术第三方检测公司
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