体液病原DNA提取试剂盒(磁珠法)适用于多种生物体液样本(如肺泡灌洗液、痰液、脑脊液等)及拭子样本的微生物DNA提取,可兼容上游经过去宿主核酸流程的样本。
体液病原DNA提取试剂盒的操作步骤:
1、200μl血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9%NaCl或者PBS补足)转入上述1.5ml离心管,加入400μl裂解液DLB,立刻涡旋振荡充分混匀。
2、室温(15-25℃)放置10分钟,每隔5分钟,振荡混匀一次。
3、加入450μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境**25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
4、将上述混合物加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。如果总体积**过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱AC中。
5、加500μl去蛋白液RE,12000rpm离心30秒,弃废液。
6、加入500μl漂洗液WB,12000rpm离心30秒,弃废液,加入500μl漂洗液WB,重复一遍。
7、将吸附柱AC放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8、取出吸附柱AC,放入一个新的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μl洗脱缓冲液EB(事先在65-70℃水浴中加热效果较好),室温放置1分钟,12,000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要的DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是至小体积不应少于20μl,体积过小降低洗脱效率,减少DNA产量。
9、DNA可以存放在2-8℃,如果要较长时间存放,可以放置在-20℃。
体液病原DNA提取试剂盒使用事项:
1、样本体积不足200ul可以加入0. 9% NaC1补足。
2、为确保样本有效裂解,加入BufferGB后,需将样本与Buffer GB充分混匀。
3、如果环境温度**过25"C,无水乙醇应在冰上预冷后使用。
4、Buffer GD中含有乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发。
5、如需进一步提高DNA 纯度,可重复步骤一次。Buffer PW中含有乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发。
6、为增加洗脱效率,可将洗脱液在50~60C预热。如需使用去离子水洗脱,可用NaOH调整其pH值在7.0~8.5之间,为了增加DNA回收率,可将得到的溶液重新加入到离心管中,室温放置2min,再次离心收集。
体液病原DNA提取试剂盒的产品特点:
1、简便快速,较短时间内可获得高纯度的病原DNA。
2、*溶剂抽提,使用安全。
3、重复性好,产量高。
4、所得病毒DNA纯度高,污染物和抑制剂少,方便下游应用。
体液中病原dna的提取步骤中,去污剂用于破坏细胞或病毒蛋白外壳或膜结构,使核酸游离到溶液中,胍盐或盐用于变性蛋白质,释放其结合的核酸并促进核酸与硅基质膜或磁珠结合,同时也具有裂解病毒外壳或膜结构的功能,如果使用溶剂,也可以破坏细胞结构,变性蛋白质进而释放核酸。
体液病原DNA提取试剂盒保存条件:常温运输和保存,长期放置时(1月以上)应该放4℃。且具有挥发性,使用后需要将瓶盖拧紧。
一般来说,核酸分离方法包括酚仿抽提法、冻融法、煮沸法和硅胶膜吸附、磁珠分离等,提取步骤中一般含有细胞裂解、沉淀,离心、漂洗、洗脱、溶解核酸等过程。目前在体液病毒DNA的提取过程中,一般采用硅胶膜吸附或磁珠分离法,经常会用到蛋白酶k加热消化、处理、含醇洗液漂洗、加热洗脱等步骤,操作较为繁琐,现有的一些试剂盒含有具有一些有毒物质,会损害人体健康。另外,受到洗脱液体积的影响,往往难以将回收到的dna全部用于检测,进而影响了检测灵敏度。
我们公司始终不渝的恪守“诚信经营、力求创新”的创业信念和坚持不懈的奉行“团结奋斗、务实创新”的企业精神!欢迎新老客户光临、携手合作、共创双赢。
南京兔牙生物科技有限公司(BunnyTeeth Technology Inc.),致力于构建完善的生物工程**技术平台,全力打造高品质生物制品产品链和技术服务链,立志成为**生物分子领域,为客户提供分子诊断以及检测领域一站式服务的解决方案。 公司秉承推动祖国生命科学事业发展的信念和使命,着眼于生物工程领域,依托*的**竞争力,引进**生产设备及生产工艺,建立一整套完整的内部质量控制体系。 公司产品广泛应用于生命科学、、农业、制药、环境等领域的基础研究。**客户覆盖高通量测序企业、分子诊断试剂生产企业、科研院校、各级机构等单位,为生物科技行业发展提供强有力的支撑。 公司产品主要包括:样本保存管、游离DNA提取、基因组DNA提取,RNA提取,DNA产物纯化,PCR/RT-PCR及qPCR产品,二代测序(NGS)文库构建产品和科技服务,和点突变产品,RPA检测试剂盒,蛋白质检测相关产品。除此之外,公司还提供实验室常用仪器和自动化工作站,自动化核酸提取仪及配套试剂,开放式主流自动化核酸平台的整合方案。