• 提取灵敏度高 北京磁珠法 较大程度避免样本中的损失

    提取灵敏度高 北京磁珠法 较大程度避免样本中的损失

  • 2022-07-14 08:37 41
  • 产品价格:面议
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  • 信息编号:90364300公司编号:4265639
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    产品描述
    体液病原DNA提取试剂盒(磁珠法)适用于多种生物体液样本(如肺泡灌洗液、痰液、脑脊液等)及拭子样本的微生物DNA提取,可兼容上游经过去宿主核酸流程的样本。
    体液病原DNA提取试剂盒的操作步骤:
    1、200μl血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9%NaCl或者PBS补足)转入上述1.5ml离心管,加入400μl裂解液DLB,立刻涡旋振荡充分混匀。
    2、室温(15-25℃)放置10分钟,每隔5分钟,振荡混匀一次。
    3、加入450μl无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境**25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。
    4、将上述混合物加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13000rpm离心30-60秒,倒掉收集管中的废液。如果总体积**过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱AC中。
    5、加500μl去蛋白液RE,12000rpm离心30秒,弃废液。
    6、加入500μl漂洗液WB,12000rpm离心30秒,弃废液,加入500μl漂洗液WB,重复一遍。
    7、将吸附柱AC放回空收集管中,13000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
    8、取出吸附柱AC,放入一个新的离心管中,在吸附膜的中间部位加30-50μl洗脱缓冲液EB(事先在65-70℃水浴中加热效果较好),室温放置1分钟,12,000rpm离心1分钟。如果想得到较多量的DNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,12,000rpm离心1分钟。洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要的DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是至小体积不应少于20μl,体积过小降低洗脱效率,减少DNA产量。
    9、DNA可以存放在2-8℃,如果要较长时间存放,可以放置在-20℃。
    北京磁珠法
    体液病原DNA提取试剂盒使用事项:
    1、样本体积不足200ul可以加入0. 9% NaC1补足。
    2、为确保样本有效裂解,加入BufferGB后,需将样本与Buffer GB充分混匀。
    3、如果环境温度**过25"C,无水乙醇应在冰上预冷后使用。
    4、Buffer GD中含有乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发。
    5、如需进一步提高DNA 纯度,可重复步骤一次。Buffer PW中含有乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发。
    6、为增加洗脱效率,可将洗脱液在50~60C预热。如需使用去离子水洗脱,可用NaOH调整其pH值在7.0~8.5之间,为了增加DNA回收率,可将得到的溶液重新加入到离心管中,室温放置2min,再次离心收集。
    北京磁珠法
    体液病原DNA提取试剂盒的产品特点:
    1、简便快速,较短时间内可获得高纯度的病原DNA。
    2、*溶剂抽提,使用安全。
    3、重复性好,产量高。
    4、所得病毒DNA纯度高,污染物和抑制剂少,方便下游应用。
    北京磁珠法
    体液中病原dna的提取步骤中,去污剂用于破坏细胞或病毒蛋白外壳或膜结构,使核酸游离到溶液中,胍盐或盐用于变性蛋白质,释放其结合的核酸并促进核酸与硅基质膜或磁珠结合,同时也具有裂解病毒外壳或膜结构的功能,如果使用溶剂,也可以破坏细胞结构,变性蛋白质进而释放核酸。
    体液病原DNA提取试剂盒保存条件:常温运输和保存,长期放置时(1月以上)应该放4℃。且具有挥发性,使用后需要将瓶盖拧紧。
    北京磁珠法
    一般来说,核酸分离方法包括酚仿抽提法、冻融法、煮沸法和硅胶膜吸附、磁珠分离等,提取步骤中一般含有细胞裂解、沉淀,离心、漂洗、洗脱、溶解核酸等过程。目前在体液病毒DNA的提取过程中,一般采用硅胶膜吸附或磁珠分离法,经常会用到蛋白酶k加热消化、处理、含醇洗液漂洗、加热洗脱等步骤,操作较为繁琐,现有的一些试剂盒含有具有一些有毒物质,会损害人体健康。另外,受到洗脱液体积的影响,往往难以将回收到的dna全部用于检测,进而影响了检测灵敏度。
    北京磁珠法
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    主要经营核酸提取试剂盒。


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