友名生物公司-动物源成分定量检测试剂

DNA提取过程中各种试剂的作用及原理

　　溶液I—溶菌液：

　　溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1，4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。

　　葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。

　　EDTA：

　　(1)螯合Mg2 、Ca2 等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);

　　(2)EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。

PCR产物的回收（胶回收试剂盒）

1.胶回收的目的（1）去除非特异性扩增的产物（2）去除多余的底物（3）去除多余的Taq酶（4）得到目的片段

2.胶回收的过程（1）切胶：紫外下切胶，称重。之后用枪头将胶块捣碎。切胶的刀片建议选用一次性刀片，实验台等也尽可能用乙醇擦拭干净。可通过空EP管与装胶EP管质量的差值计算胶的质量。注意切胶时尽可能避免切到条带外的凝胶，且避免紫外时间过长。别忘记胶条有厚度，前后多余的部分也尽量切除。（2）溶胶：每1 mg胶加入1 μL膜结合液（MB），按比例1:1加入MB，55℃水浴溶解。每1~2 min震荡混匀，待溶解后至少在水浴中保持1~2 min，保证胶块完全溶解。在电泳过程中，DNA会与大分子的多糖紧密结合，凝胶的种类和质量不同，DNA与之结合力也不同，只有凝胶充分溶解DNA才能充分释放。否则，凝胶将与DNA一起沉淀下来，洗脱后将影响回收结果的纯度。（3）结合：将溶胶转移至纯化柱内，12000 rpm离心1 min，倒掉收集管中的废液，将纯化柱重新插回收集管中。胶块完全溶解后建议将胶液温度降至室温再上柱，因为纯化柱在温度较高时结合DNA的能力较弱。

甘油三酯（TG）检测试剂盒（比色法），动物源成分定量检测试剂，#KTB2200：用异丙1醇抽提取TG，KOH皂化TG后水解生成甘油及脂肪酸，Periodic acid氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与Acetylacetone缩合生成黄色物质，在420 nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与TG含量成正比。该试剂盒提供了一种简单的检测方法检测动物组织、细胞、serum（浆）以及植物样本中甘油三酯（TG）的含量水平；而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。

游离胆固醇（FC）检测试剂盒（比色法），#KTB2210：胆固醇氧化酶催化游离胆固醇（FC）生成△4-胆甾烯酮和H2O2，过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500 nm有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。该试剂盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本如动物组织、细胞（细菌）、serum（浆）中游离胆固醇（FC）的含量水平；而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。

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