逆转录病毒包装-友名生物公司

腺病毒分离与鉴定

1．分离培养 标本应尽早从感1染部位采集。采集患者咽喉、眼分泌物，粪便和尿液等，加抗1生素处理过夜，离心取上清接种敏感细胞（293、Hep-2或HeLa细胞等），逆转录病毒包装，37℃孵育后可观察到典型CPE，即细胞变圆、团聚、有拉丝现象，较**的表现是许多病变细胞聚在一起呈葡萄串状。

2．病毒鉴定 用荧光标记的抗六邻体抗1体与分离培养细胞作用来鉴定腺病毒，也可用血凝抑制（hemoagglutination inhibition，HI）试验或中和试验（neutralization test）检测属和组特异性抗原并鉴定病毒的血1清型。腺病毒可用Shell vial技术进行快速鉴定。病毒标本经抗1生素和离心处理，取上清接种于有细胞的Shell vial培养瓶，孵育1～2天，用特异性六邻体单克1隆抗1体对其抗原表位进行检测。也可用病1人鼻粘膜上皮脱落细胞直接染色检测病毒抗原。用DNA杂交或内切酶酶切等鉴定分离培养的病毒DNA；PCR可用于腺病毒感1染的诊断，引物设计主要根据腺病毒六邻体、VAI和VAII编码区序列，能检测所有血1清型，而且其敏感性很高，能检测某些patient潜在的腺病毒。用腺病毒41型BgIII-D片段作探针诊断腺病毒腹泻，其检出率可达80%。

腺病毒的结构

腺病毒含13%DNA和87%的蛋白质，病毒体分子量约为175×106。病毒基因组为线状双链DNA，大约含35kb～36kb，腺病毒12、18和31型的DNA组成中，G C mol%zui低（48%～49%），属于对动物具有高致癌性基因型。腺病毒1、2、4、5、8等型的G C mol%较高（61%），致癌性反而低或无。这是一种用于人腺病毒分离株的分组的标准，根据其基因同源性将人腺病毒分为A～F等6组。

　　农杆1菌转化法在植物遗传转化中的应用：过去认为受农bacillus宿主范围限制，农bacillus介导的遗传转化只限于双子叶植物。1987年Grimsly首先将玉米条斑病毒的cDNA克1隆至质粒上，用农bacillus侵染的方法将玉米条斑病毒的cDNA导入玉米，使植株表现了系统感1染症状。这个报道有力地证明了农bacillus能够侵染玉米这种单子叶植物。随着载体系统和转化方法的改进，农bacillus介导的遗传转化不再局限于双子叶植物，在一些单子叶植物如水稻、玉米和小麦等重要的农作物上也相继获得成功。

　　进入20世纪90年代后，农杆1菌转化法在水稻、玉米等重要的农作物上**突破性进展。首先是1991年Gould和Shen等利用农bacillus转化玉米茎尖分生组织获得植株。1998年Lupotto也实现了农bacillus转化玉米的成功，Southern杂交结果显示外源基因能够稳定遗传到下一代。

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