海口病原微生物试验服务 华微检测

病原微生物是指可以侵犯人体，在宿主中生长繁殖、释放毒性物质等引|起机体不同程度病理变化、发生感染的微生物，包括、病毒、、、衣原体、支原体等。
病原微生物检测——生化方法：
生化方法检测病原微生物实际上是测定微生物特酶。由于各种微生物所具有的酶系统不完全相同，对许多物质的分解能力亦不一致。因此可利用不同底物产生的不同代谢产物来间接检测该微生物内酶的有无，从而达到检测特定微生物的目的。如沙门氏菌能产生辛酯酶，这一性能是除沙门氏菌外的各属肠杆菌科所不具备的。该方法是以42甲基伞形酮辛酯(MUCAP)为底物，经沙门氏菌的酶降解后，释放出4MU，在紫外灯下观察其发出的蓝色荧光。该方法简便易行，从加入底物到紫外灯下观察到出结果仅需几分钟即可完成。其灵敏度和特分别可达95%和90%。对与H2 S(+)反应的沙门氏菌该法更为敏感，灵敏度和特均接近。大肠埃希氏菌具β2葡萄糖醛酸酶，但以O157:H7为代表的肠性大肠埃希氏菌(EHEC)却不具此酶，故β2葡萄糖醛酸酶阴性已成为初步筛查EHEC的重要特征。白色具脯氨酸肽酶及N2已酰β2D半乳糖苷酶，分别以合适的试剂检测，两酶均阳性即为白色。

病原微生物检测——血清免疫学方法：
免疫学技术是利用特抗原抗体反应，观察和研究组织细胞、特定抗原(抗体)的定性和定量技术。为了显示和观察这种抗原抗体反应，需要预先将某种标记物结合到抗体上，借标记物的荧光或酶的有色反应、放射性或高电子密度，在光镜或电镜下进行定性、定位或定量研究。各种形式的免疫分析方法如放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析(EIA)、间接酶联免疫吸附(EL ISA)、荧光免疫分析(FIA)、生物发光免疫分析(BIA)、化学发光免疫分析(CIA)等，直接检测微生物或通过间接检测微生物的成份及微生物代谢产物(如)检出微生物。各大文献数据库提供的数据显示，几乎建立了所有病原体的血清学检测方法，表明该方法也成为了一种实验室常用的成熟的检测技术。

病原微生物检测——生物芯片：
生物芯片技术是将生物大分子，如寡核苷酸、cDNA、基因组DNA、肽、抗原以及抗体等固定在诸如硅片、玻璃片、塑料片、凝胶和尼龙膜等固相介质上形成生物分子点阵，当待测样品中的生物分子与生物芯片的探针分子发生杂交或相互作用后，利用激光共聚焦显微扫描仪对杂交信号进行检测和分析。根据生物芯片上探针的分子种类而将之分为DNA芯片(即基因芯片)和蛋白质芯片。微生物检测基因芯片是指用来检测样品中是否含有微生物目的核酸片段的芯片。基于高通量、微型化和平行分析的特点，微生物检测基因芯片在微生物病原体检测、种类鉴定、功能基因检测、基因分型、突变检测、基因组监测等研究领域中发挥着越来越重要的作用。

病原微生物检测——分子生物学与免疫学相结合的方法：
1、免疫PCR：
免疫PCR(immuno polymerase chain reaction，IM PCR)是1992年Sano等[16]建立的一种检测微量抗原的高灵敏度技术。该技术把抗原抗体反应的高特和聚合酶链反应的高敏感性有机结合起来，它的基本原理是用一段已知DNA分子标记抗体作为探针，用此探针与待测抗原反应，PCR扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA分子，电泳定性，根据特PCR产物的有无，来判断待测抗原是否存在。目前，国内外报道的免疫PCR的敏感性一般比现行的EL ISA法高102～105倍。由于PCR产物在抗原量未达到饱和前与抗原抗体复合物的量成正比，因此免疫PCR还可用于抗原的半定量试验。
2、PCR2EL ISA：
PCR2EL ISA法是PCR与EL ISA技术结合的检测方法。其综合了PCR，分子杂交，和EL ISA 3种技术的优点。主要用于检测样品中的特定基因。它引入(或生物素)标记的dN TP或引物进行PCR扩增，利用酶标抗抗体(或酶标记亲和素)进行EL ISA检测，代替了用于常规PCR产物检测的电泳方法，方便快捷，易于处理大量样品，且其灵敏度比使用琼脂糖凝胶电泳检测方法高100倍，当有适当的标准品时，还可进行定量测定。
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