PMA-EMA-LED32光解仪

PMA-EMA-LED32光解仪
 

PMA-EMA-LED32光解仪：是一种轻质 LED辐照设备，设计用于在活性检测 PCR 应用中对PMA及其他光反应染料进行控制时间和温度的光处理。
适用于细菌，病毒，真菌的PCR分析，结合DNA,交联等。样本还包括生物膜，酵母，真核细胞，应用食品 水安全和环境测试。
叠氮溴化丙锭（Propidium Monoazide，PMA）是一种光反应的DNA结合染料，用于微生物（比如：细菌、病毒和真菌）的活力PCR（v-PCR）分析。作为一种DNA修饰剂和光反应染料，PMA高亲和结合DNA。经可见光刺激发生光裂解后，PMA共价吸附到DNA上，这一改性的DNA不能被PCR扩增。PMA染料不具细胞膜渗透性，因此，在含活死细胞的群体内，只有死细胞对DNA修饰剂敏感，由于具受损的细胞膜。PMA染料的这一特性，使其高度适合通过PCR的手段来选择性检测活细菌。
叠氮溴化丙锭（Propidium Monoazide，PMA）具有以下特征：①利用PCR技术选择性检测活细胞；②死细胞特异性染料，结合到DNA上；③光活化后共价交联到DNA上；④适用于多种样本类型包括：细菌、生物膜、酵母、真菌、病毒和真核细胞；能应用在食品和水安全和环境测试，能与PCR、NGS、Sanger测序和LAMP技术结合使用。
叠氮溴化乙锭（Ethidium Monoazide Bromide，EMA）是一种具光亲和标记特性的荧光核酸染料。EMA经光分解后，能共价结合到溶液和损伤的细胞核酸上。此染料能用来印记DNA上的药物结合位点，检测死细胞，鉴定DNA和tRNA上的乙锭结合位点和选择性失活基因表达。EMA最特殊的用途是标记死活细胞群内的死细胞，因其相对来说不具有细胞膜渗透性，则选择性结合死细胞的DNA。EMA还能通过5′核酸酶PCR来区分死细菌和活细菌。EMA本身荧光较弱，当与DNA结合后荧光增强约15倍，最大激发/发射波长约510/600nm。
产品特点：
1.	工作电压：AC220V/50Hz
2.	标配1.5ml/2ml离心反应管
3.	一次可允许18管或者32管样品同时照明
4.	内风扇确保温度低于37度
5.	照明时间自由设定：1-999分钟
6.	LED光波长465-475nm
7.	用途：可有效地激活PMA, PMAxx, EMA和相似的染料
 
技术参数：
尺寸	21 x 15.9 x 6.7 厘米
重量	1.85 千克
频率范围	50~60 Hz
电压范围	220 VAC
大功率	60 W
LED输出波长	465-475 nm
可以另配： 120/240 V 转换器，用于国外接口。

应用案例：
弧菌(vibrio)是水产品中为常见的致病菌，副溶血性弧菌(vibrioparahaemolyticus)是主要水产源致病菌，由该菌引起的食物中毒事件居细菌性食物中毒事件的首位，同时也被视为范围内导致腹泻类疾病的为主要因素之一。霍乱弧菌(vibrio cholerae)是导致人体产生霍乱疾病的主要源头，流行广泛且属于烈性传染病之一，曾多次引起大面积的疾病，主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水，严重的可导致死亡，如何快速、精准和高效地检测水产品中致病弧菌具有重要意义。
传统定量检测食品中副溶血性弧菌和霍乱弧菌的方法通常需要1周时间，基于DNA的 qPCR定量技术虽简便快捷，但无法区分样品中死菌和活菌，容易导致假阳性现象。光敏型核酸染料叠氮溴化丙锭(PMA)与qPCR技术相结合，可以选择性地识别水产品中的活菌dna，可用于进行活菌定量检测。PMA前处理包括暗处理和光交联两个关键步骤，传统的 PMA前处理方法通常在一个密闭的环境进行暗处理，手持600w左右的钠钨灯进行光交联，过程繁琐，全程人工操作费时耗力；基于蓝光led管的光交联仪器PMA-EMA-LED32光解仪可大大简化pma前处理过程。
活性聚合酶链反应
活性PCR是一种强大的技术，用于灵敏和快速地检测活微生物。与耗时的培养方法不同，PCR 是一种快速灵敏的检测方法。然而，正常的PCR不能区分活细胞和死细胞。使用PMA 的 v-PCR，您可以获得 PCR 的速度、灵敏度和特异性，以及可量化的活力。由于无需培养，您甚至可以检测活菌但不可培养 （VBNC） 细菌。v-PCR 技术不仅可以应用于细菌，还可以应用于酵母、病毒、真核生物和古细菌等其他生物。

PMA 对死细菌DNA 的共价结合效率受到多种因素的影响，主要因素有细菌种类、菌液浓度、PMA 浓度和曝光时间等。PMA 浓度和曝光时间的选择在于:PMA 浓度过低或曝光时间过短则不能充分结合和修饰死细菌的DNA; 而PMA 浓度高到一定程度则会有不容忽视数量的PMA 分子渗透进活细菌细胞内，长的曝光时间将增强其对活菌DNA 的结合和修饰作用。因此采用PMA-qPCR 对某一研究体系中特定活细菌进行走量检测时，往往先在固定的纯菌浓度下探究佳的PMA 处理浓度和曝光时间，之后用于实际从而达到更高的准确率。

PMA -qPCR ~t菌检测方法的建立与应用
(1)制备细菌悬液:培养好纯菌后，适当稀释到一定浓度(如OD600=1，即经过稀释使得在600nm 下的吸光值为1)，取若干份等体积的菌，其中一半采用加热和超声处理结合制备死菌样品，而另外一半不做处理为活菌样品;
(2) PMA 处理:在不同的PMA 浓度和曝光时间下处理(1)中的活菌组和死菌组样品;
(3) qPCR 扩增和数据分析:提取(2) 中经PMA 处理的样品的基因组DNA ，以此为模板采用该细菌特异性的qPCR 引物进行扩增，得到各组的Ct 值(qPCR 荧光阔值同扩增曲线交点对应的循环数)综合分析选出佳的PMA 处理条件。低的PMA 浓度和曝光时间为死细菌组Ct 值稳定时(即不随PMA 浓度和曝光时间的增加而发生显著的增高，如Ct 值增量不超过1)的处理浓度和时间，高的PMA 浓度和曝光时间为活细菌Ct 稳定时的处理浓度和时间;而佳的PMA 处理条件则在高和低的PMA 浓度和曝光时间之间的实际处理条件中择优选定，这样在保证充分抑制死细菌DNA 扩增的同时又不会影响到活细菌DNA 的扩增。

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