苏州酶制剂а-淀粉酶活性检测

附录A酶活力测定方法

A.1一般规定

本标准所用试剂和水,在没有注明其他要求时,均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。试验中所用标准溶液,杂质标准溶液、制剂及制品,在没有注明其他要求时,均按GB/T 601,GB/T 602和GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时,均指水溶液。

A.2α-淀粉酶活力的测定

A.2.1α-淀粉酶

能水解淀粉分子链中的a-1,4葡萄糖苷键,将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖,使淀粉黏度迅速下降的酶。

A.2.2α-淀粉酶活力

A.2.2.1中温α-淀粉酶活力单位

1 g固体酶粉(或1 mL液体酶),于60 ℃,pH 6.0条件下,1h液化1 g可溶性淀粉,即为1个酶活力单位，以U/g(U/ml)表示。

A.2.2.2耐高温α-淀粉酶活力单位

1 g固体酶粉(或1 mL液体酶),于70 ℃,pH 6.0条件下,1 min液化1 mg可溶性淀粉,即为1个酶活力单位,以 U/g(U/ml)表示。

A.2.3原理

a-淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的a-1,4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖,而使淀粉对碘呈蓝紫色的特性反应逐渐消失,呈现棕红色,其颜色消失的速度与酶活性有关,据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。

A.2.4试剂和材料

A.2.4.1碘。

A2.4.2碘化钾。

A.2.4.3原碘液;称取11.0 g碘和22.0g碘化钾,用少量水使碘完全溶解,定容至500 ml.,贮存于棕色瓶中。A.2.4.4︰稀碘液;吸取原碘液⒉00 mL,加 20.0 g碘化钾用水溶解并定容至500 ml.,贮存于棕色瓶中。

A.2.4.5可溶性淀粉溶液(20 g/L):称取2.000 g(**至0.001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物,边搅拌边缓缓加入70 mL,沸水中,然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯,洗液倒入其中,搅拌加热至完全透明,冷却定容至100 ml。溶液现配现用。

注:可溶性淀粉应采用酶制剂分析**淀粉。

A.2.4.6你磷酸缓冲液(pH 6.0):称取45.23 g磷酸氢二钠(NagHPO·12HO)和8.07 g柠檬酸(CHO·HO,用水溶解并定容至1 o00 ml。用pH计校正后使用。

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